HPLC-UV y LC-MS responden preguntas distintas
La pureza y la identidad no son la misma propiedad, y los dos métodos que las miden no se sustituyen entre sí.
Dos métodos, dos preguntas
Ninguno sustituye al otro. Cada lote de PEPTiQX lleva los dos.
Cada lote que liberamos lleva un resultado de pureza por HPLC-UV y una confirmación de identidad por LC-MS. A veces nos preguntan por qué pagamos por ambos. La respuesta breve es que responden preguntas distintas.
## Qué le dice la HPLC-UV
La HPLC en fase reversa separa los componentes por hidrofobicidad. Un detector UV a 214 nm ve el enlace peptídico, lo que significa que responde prácticamente a cualquier péptido de la muestra: tanto a su objetivo como a sus secuencias de deleción. Integrar los picos le da una cifra de pureza relativa. Lo que no puede hacer es decirle qué pico es cuál.
## Qué le dice la LC-MS
La espectrometría de masas mide la relación masa-carga. Comparar la masa medida con la masa monoisotópica teórica de su secuencia confirma que tiene el compuesto que pidió. Una sola sustitución de aminoácido desplaza la masa de forma medible: así se detectan los errores de secuencia.
## Por qué ambos
HPLC sin MS le da un desconocido puro. MS sin HPLC le da una identidad confirmada en una mezcla sin caracterizar. Ejecutados juntos, indican que la molécula correcta está presente y que poco más lo está.
